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    FluoroSpot荧光免疫斑点实验

    2021-05-07
    浏览次数: 67
    FluoroSpot荧光免疫斑点实验可用于单细胞水平上检测多种细胞因子的分泌。和ELISpot一样,是一种灵敏、操作简单的方法。在FluoroSpot实验中,不同细胞因子的单抗混合物用到了夹心法中。不同于ELISpot,FluoroSpot使用的是荧光标记的检测试剂。一种分析物用生物素化抗体检测,另外一种分析物使用tag标记的抗体检测。这种实验方法的设计保证了可以在同一孔内进行2种细胞因子的检测。接下来使用红色荧光标记的Streptavidin和绿色荧光标记的抗tag抗体进行信号的级联放大。使用自动荧光读板仪分析产生的2种颜色的荧光斑点并生成图像。图像叠加后上显示在相同位置的荧光斑点表示为同时分泌2种细胞因子的细胞。


    FluoroSpot荧光免疫斑点实验
                                            图1   FluoroSpot检测原理                                                 图2  白色念珠菌提取物处理和未处理的PBMC细胞
    (300,000
                                                                                                                                          cells/well)过夜培养后,使用FluoroSpot检测分泌 IFN-γ 和 / 
                                                                                                                                         或IL-22的细胞。使用AID (Autoimmun Diagnostika GmbH)
                                                                                                                                         公司的iSpot分析仪进行斑点分析。在FITC (IFN-γ) 和 Cy3
                                                                                                                                         (IL-22)叠加图片上相同位置显示的斑点表示为同时分泌IFN-γ
                                                                                                                                         和 IL-22的细胞。
    FluoroSpot试剂盒信息
     FluoroSot试剂盒
     产品名称
     编号
     供应商
     Human IgG/IgA FluoroSpot kit
     FS-05R06G
     Mabtech
     Human IgG/IgM FluoroSpot kit
     FS-05R17G
     Mabtech
     Human IgG/IgA/IgM FluoroSpot kit
     FS-050617
     Mabtech
     Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit
     FS-0110
     Mabtech
     Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit, pre-coated
     FSP-0110
     Mabtech
     Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
     FS-0102
     Mabtech
     Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit, pre-coated
     FSP-0102
     Mabtech
     Human IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
     FS-0108
     Mabtech
     Human IFN-γ/IL-13 FluoroSpot kit
     FS-0104
     Mabtech
     Human IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
     FS-0103
     Mabtech
     Human IFN-γ/IL-22 FluoroSpot kit
     FS-0118
     Mabtech
     Human IL-1β/GM-CSF FluoroSpot kit
     FS-1215
     Mabtech
     Human IL-1β/IL-6 FluoroSpot kit
     FS-1213
     Mabtech
     Human IL-1β/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
     FS-1214
     Mabtech
     Human IL-1β/TNF-α FluoroSpot kit
     FS-1209
     Mabtech
     Human IL-6/GM-CSF FluoroSpot kit
     FS-1315
     Mabtech
     Human IL-6/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
     FS-1314
     Mabtech
     Human IL-6/TNF-α FluoroSpot kit
     FS-1309
     Mabtech
     Human TNF-α/GM-CSF FluoroSpot kit
     FS-0915
     Mabtech
     Human TNF-α/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
     FS-0914
     Mabtech
     FluoroSot试剂盒
     Monkey IgG/IgA FluoroSpot kit
     FS-05R24G
     Mabtech
     Monkey IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
     FS-2122
     Mabtech
     小鼠FluoroSot试剂盒
     Mouse IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
     FS-4142
     Mabtech
     Mouse IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
     FS-4143
     Mabtech
     Mouse IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
     FS-4144
     Mabtech

    *注意事项
     1. 使用抗CD28抗体对CD28共刺激,可以提高IL-2的分泌
    在FluoroSpot实验中,捕获抗体对细胞因子的捕获可能会影响细胞因子的分泌。板孔里包被的IL-2捕获抗体能够降低游离IL-2的分泌,而游离IL-2对T细胞活化是必须的。为了补偿这种影响,可使用抗CD28单抗进行共刺激,在合适的浓度下可以增加特异性抗原的分泌而不会增加自然分泌。其他细胞因子也有可能会受到捕获抗体的影响,因此使用抗CD28抗体刺激在很多情况下可以有效的解决这个问题。
    2.建议使用带分离滤光片的自动读板仪分析
    建议使用带FITC和Cy3滤光片的自动荧光ELISpot分析仪仪分析FluoroSpot。为了准确的检测2种细胞因子分泌的细胞,分析仪需要具有对2种滤光片获得的信号进行叠加分析的能力。


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