◆ 人IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot PLUS和IFN-γ SARS-CoV-2 ELISpot PLUS试剂盒

IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot PLUS试剂盒可用于对SARS-CoV-2多肽应答中能够分泌干扰素γ（IFN-γ）、白介素2（IL-2）细胞因子或同时分泌这两种细胞因子（FluoroSpot）的细胞进行定量，IFN-γ SARS-CoV-2 ELISpot PLUS试剂盒（ALP）仅可对能够分泌干扰素γ（IFN-γ）的细胞进行计数。FluoroSpot分析方法是对ELISpot分析方法的一种创新性发展，其最大的优势是可以同时检测多个指标。FluoroSpot使用荧光法进行检测，在结果读取时Mabtech推荐使用配有过滤器的自动FluoroSpot读板仪，使用激发波490 nm/发射波510 nm（FITC）检测490试剂，使用激发波550 nm/发射波570 nm（Cy3）检测550试剂，同时过滤器应该具有高度的特异性，以避免渗色伪像。分泌两种细胞因子的细胞由计算机处理的覆盖图模式识别。

▶ 试剂盒组分

人IFN-γ/IL-2 SARS-CoV-2 FluoroSpot PLUS试剂盒

● 预包被有单克隆捕获抗体的低荧光板

● SARS-CoV-2 S2 N定义肽库、SARS-CoV-2 S1蛋白扫描肽库

● 单克隆检测抗体

● 共轭于荧光基团的辅助试剂

● 荧光增强剂

● 用于共刺激的CD28单克隆抗体

人IFN-γ SARS-CoV-2 ELISpot PLUS试剂盒（ALP）

● 预包被单克隆抗体的ELISpot可拆板

● SARS-CoV-2 S2 N定义肽库、SARS-CoV-2 S1蛋白扫描肽库

● 生物素化的检测抗体

● 链霉亲和素- ALP

● 即用型TMB底物

另外，Mabtech还提供了人T细胞的多克隆抗体（mAb CD3-2）作为细胞因子分泌的阳性对照。

▶ 产品特色

● 方便快速

● 灵敏度高

● 稳定性好

▶ 应用实例

使用IFN-γ/IL-2 FluoroSpot和IFN-γ ELISpot对SARS-CoV-2 S1 S2 N定义肽库进行验证。SARS-CoV-2 S1 S2 N定义肽库包含41条来自人类SARS-CoV-2病毒刺突蛋白（spike protein，S）和核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein，N）的多肽，可对能够特异性识别刺突蛋白（Spike protein, S）和核衣壳蛋白（Nucleocapsid protein, N）的淋巴细胞进行定量。

用Mabtech's SARS-CoV-2 S1 S2 N 肽库对来自3例先前经PCR证实为SARS-CoV-2阳性患者的外周血单核细胞（PBMC）及未感染COVID-19健康人体内的外周血单核细胞（PBMC）进行刺激（每孔250,000 个细胞），植物血凝素（PHA）刺激的细胞作为阳性对照（每孔50000个细胞），未刺激的细胞作为阴性对照（每孔250,000 个细胞）。Mabtech IRIS通过使用IFN-γ/IL-2 FluoroSpot 对T细胞应激反应进行分析。

人干扰素γ（IFN-γ）的ELISpot结果。使用CD8Fab-TACS®分离试剂盒（IBA Lifesciences）对全血中CD8+细胞进行分离，将分离出的细胞加入预先包被好人干扰素γ（IFN-γ）的ELISpot板中（每孔300,000个细胞），孵育过夜。左图无Mabtech肽库，右图有Mabtech肽库。

使用IFN-γ ELISpot对SARS-CoV-2 刺突蛋白（S）S1亚基扫描肽库进行验证。SARS-CoV-2 刺突蛋白（S）S1亚基扫描肽库是对之前SARS-CoV-2 刺突蛋白（S）S2亚基及核衣壳蛋白（N）肽库的补充，其包含166个来自人类SARS-CoV-2病毒的多肽，这些多肽由15个聚体和11个氨基酸重叠而成，覆盖刺突蛋白（S）的S1结构域（氨基酸13-685）。肽库以冻干粉的形式提供，分为两瓶，每瓶各含有83个多肽。合成肽的平均纯度为80%。

人干扰素γ（IFN-γ）的ELISpot结果。取先前经PCR证实为SARS-CoV-2阳性患者的外周血单核细胞（PBMC），加入预先包被好人干扰素γ（IFN-γ）的ELISpot板中（每孔300,000个细胞），孵育过夜，使用ELISpot对分泌IFN-γ 的细胞进行计数。左图无SARS-CoV-2 S1 扫描肽库和CD28抗体，右图有SARS-CoV-2 刺突蛋白（S）S1亚基扫描肽库和CD28抗体。

◆ 人IgG SARS-CoV-2受体结合区域（RBD）ELISpot PLUS (HRP)试剂盒

人在感染SARS-CoV-2后，机体内的先天性免疫系统会产生特异性识别新冠病毒表面蛋白的抗体，如刺突蛋白（S）、核衣壳蛋白（N）、膜蛋白（M）等。新冠病毒与人体的作用位点是其表面刺突蛋白（S）的受体结合区域（RBD）与人血管紧张素转化酶2（ACE2）受体，因此特异性识别SARS-CoV-2 受体结合区域（RBD）的抗体可有效阻止病毒与人体结合。Mabtech的人IgG SARS-CoV-2 受体结合区域（RBD）ELISpot PLUS （HRP）试剂盒可对能够分泌SARS-CoV-2 受体结合区域（RBD）特异性IgG抗体的B细胞及分泌IgG（总IgG）的所有细胞进行定量，检测原理如下。

▶ 试剂盒组分

● 预包被抗人IgG单克隆抗体

● 带有免疫缺陷伴血小板减少综合征（WASP）标记的重组受体结合区域（RBD）蛋白

● 生物素化检测单抗

● HRP标记的抗免疫缺陷伴血小板减少综合征蛋白（WASP）抗体

● HRP标记的链霉亲和素

● 多克隆激活剂

● 即用型TMB底物

▶ 产品特色

● 方便快捷

● 灵敏度高

● 稳定性好

▶ 应用实例

使用ELISpot对可分泌受体结合区域（RBD）特异性抗体IgG的细胞进行定量。在离心管中分别培养来自COVID-19康复期及健康人体内的外周血单核细胞（PBMC）3天。彻底清洗细胞并加入预包被抗人IgG单克隆抗体的ELISpot孔板（200,000个细胞/孔）中，用带有WASP标签的重组受体结合区域（RBD）抗体和HRP标记的抗WASP抗体检测RBD特异性斑点。左图有R848+IL-2（用于刺激记忆B细胞），右图无R848+IL-2。

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