近年基因组学和表观遗传学领域引入了两种新方法:
核酸酶靶向切割和释放技术(CUT&RUN)
靶向剪切及转座酶技术(CUT&Tag)
CUT&RUN和CUT&Tag检测法正在取代ChIP-seq
简化的工作流程跳过了ChIP-seq实验法中的挑战性步骤,包括染色质片段化和抗体pull down,用更少的细胞和测序读数得到更佳的数据。
具体变现为:
1.低细胞需求量;
2.高吞吐量;
3.操作流程更简易;
4.低成本,测序读取次数更少;
5.数据质量可靠,重复性好
EpiCypher CUT&Tag:
孵育结合好特异性抗体与靶标蛋白后,加入蛋白 A、蛋白G与Tn5的复合物(pAG-Tn5),使得转座体进入细胞并与抗体结合,间接地固定在靶蛋白上;激活Tn5酶的切割活性,将靶蛋白结合的DNA区域切断,从而达到提取DNA、进行PCR扩增、构建文库的目的。在Tn5上融合了protein A/G抗体结合功能域的转座体pAG-Tn5是关键的进步,因为这一步允许研究者不必碎裂染色质以及进行传统的库准备步骤。
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