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什么是内毒素污染?生物试剂内毒素如何检测?

2023-02-07
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内毒素污染

内毒素,又称脂多糖(LPS),是革兰氏阴性细菌的主要细胞壁成份。内毒素的来源包括培养基、血清、水、缓冲溶液和其他细胞培养试剂,如胰蛋白酶。内毒素是体内外炎症反应的有效诱导剂。内毒素污染是细胞培养和生产注射药物中的主要问题。溶液和试剂可能是无菌但仍含有细菌成分,因此监测细胞培养试剂中是否存在内毒素至关重要。


注意:“内毒素”有时候用于描述细菌其他组成部分(如鞭毛蛋白),但在细菌学中它仅指脂多糖。


LPS的基本结构

什么是内毒素污染?生物试剂内毒素如何检测?


常见的内毒素污染源?

— 使用高纯度水制备培养基和溶液,清洁玻璃器皿。

玻璃器皿 — 为了消除内毒素,必须将玻璃器皿加热至250°C维持≥30分钟,或加热到180°C维持 3 小时1。

培养液、血清和添加剂 — 使用前要求制造商提供内毒素水平认证或测试。

塑料容器 — 要求制造商提供内毒素水平和无致热源的证明。


让 InvivoGen 保障您的安全 !所有InvivoGen的试剂都经过彻底测试,以确保不存在细菌污染,包括内毒素。


我的实验有什么风险?

内毒素在体外和体内实验均可引起显著的不稳定性。脂质A部分能够激活细胞表面或内体的Toll样受体4(TLR4),诱导MAP激酶(MAPK)、NF-κB和IRF(干扰素调节因子)通路的激活。尽管内毒素的作用随浓度和细胞类型的不同而改变,但它们确实可以改变细胞形态、影响增殖和转染效率。此外,LPS还诱导了炎性细胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18的产生,并激活caspase 4/5/11-NLRP3 非经典炎症小体,导致细胞焦亡。

在体内实验,低内毒素浓度可刺激免疫系统,而高浓度可引起发烧、低血压、多器官衰竭,甚至死亡。


内毒素在体内外的主要影响

什么是内毒素污染?生物试剂内毒素如何检测?

1. Gorbet MB. & Sefton MV., 2005., 2. Leider, R. et al. 2013., 3. Nims, RW. & Price PJ. 2017., 4. Rathinam VAK. et al., 2019


生物试剂内毒素检测


HEK-Blue™ LPS 检测试剂盒 2

基于细胞的比色法分析

• 用途广泛:适用于几乎所有的生物试剂

• 高灵敏度:检测限为0.01 EU/ml

• 经济实惠:1个试剂盒最多可进行500次测试


HEK-Blue™ LPS 检测试剂盒2的原理

什么是内毒素污染?生物试剂内毒素如何检测?

试剂盒依赖于InvivoGen专有的HEK-Blue™-4细胞,该细胞稳定表达人源TLR4和一个NF-κB诱导的分泌型胚胎碱性磷酸酶(SEAP)报告基因。


简单的实验程序使该试剂盒成为常规测试的理想选择。只要样品中含有微量的LPS,在与HEK-Blue™-4细胞孵育过夜后,会导致NF-κB的激活和SEAP报告基因的表达。培养上清液中的SEAP活性通过加上底物QUANTI-Blue™溶液,并使用分光光度计在620-655 nm的波长测量。吸光度与内毒素含量成正比。使用试剂盒中提供的HEK-Blue™内毒素标准品,经系列稀释获得标准曲线从而计算内毒素浓度(大肠杆菌055:B5 LPS的制备参照FDA批准的内毒素工作标准品(CSE)制备标准)。HEK-Blue™ LPS检测试剂盒2 在InvivoGen公司内部用作常规检测。


使用该试剂盒的5大原因

1.替代昂贵而耗时的鲎试剂(LAL)。

购买此套件一次,冻存HEK-Blue™-4细胞,以后只需重新订购其他耗材。

2.与LAL分析不同,如果样品含有(1,3)-β-D-葡聚糖,使用HEK-Blue™-4细胞进行LPS检测不会导致假阳性。

3.适用于所有生物样品,包括培养基、血清、化学制剂和疫苗佐剂。

4.溶液颜色从粉红色变为紫/蓝色表示 阳性反应,结果简单可视。

5.包括一本实验程序小册子,计算内毒素浓度的方法,以及疑难排解部分。


产品订购

产品名称 
产品说明货号规格
HEK-Blue™ LPS Detection Kit 2Assay for the detection and quantification of biologically active LPSrep-lps21 kit 
HEK-Blue™ Selectionntibiotics for maintenance of HEK-Blue™ cellshb-sel10 x 1ml
HEK-Blue™ Endotoxin StandardStandardized E. coli 055:B5 LPSrep-hbes-1010 x 50 EU
Normocin™Reagent for preventing microbial contamination

ant-nr-1

ant-nr-2

500 mg (10 x 1 ml)

1 g (1 x 20 ml)

QUANTI-Blue™ SolutionAlkaline phophatase detection medium (liquid form)

rep-qbs

rep-qbs2

5 ml

10 ml 


详情请咨询Invivogen授权一级代理商-九游会j9网站首页 

全国服务热线: 4006-800-892       邮箱: market@qckc0531.com 

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