九游会j9网站首页,j9九游会首页登录,j9九游会ag真人官网

您好,欢迎光临九游会j9网站首页商城!
服务热线:400 680 0892
新闻资讯 News

免疫细胞化学故障排除指南

2022-07-11
浏览次数: 105

根据下列的免疫细胞化学故障排除指南来快速找出问题原因,改善您的实验步骤和解决方案。首先从下列选项中找到对应您免疫细胞化学染色问题的图片:

染色较弱或没有染色高背景染色非特异性染色
免疫细胞化学故障排除指南免疫细胞化学故障排除指南免疫细胞化学故障排除指南

一、染色较弱或没有染色:


细胞从盖玻片上脱离: 减少洗涤步骤或轻缓洗涤;用多聚赖氨酸将细胞黏合到盖玻片上


细胞没有被通透: 甲醇和丙酮固定能使细胞通透性增强;如果使用甲醛, 用0.2% Triton X-100通透细胞


细胞失水变干: 在整个染色过程中样品必须保持覆盖于液体中


细胞固定过度: 减少固定时间


一抗量不够: 提高抗体浓度;加长孵育时间;


孵育时间太短: 增加一抗和样品的孵育时间


切片储存问题: 样品处理之后应该应该马上成像,不然信号会随时间推移而减弱。如果需要可以将切片于 4⁰C 黑暗处储存。


一抗二抗不兼容: 二抗应该是抗一抗宿主的。例如,如果一抗是小鼠来源的,那就需要用抗小鼠的二抗;亚型需要兼容


一抗不适用: 确保抗体验证过可以用于ICC;先在免疫印迹中测试抗体, 确保抗体没有变质


储存问题: 反复冷冻/解冻是对抗体不利的,可引起降解. 最好是在收到产品时将其分成多个小份来保存;抗体没有按照建议的方式保存. 如果是这样的话可能需要重新购买一支;如果二抗没有在黑暗处保存 (使用免疫荧光时), 应更换一支新的二抗。


蛋白没有在检测的组织中出现: 做一个阳性对照;如果目标蛋白显现但是信号不强, 增加一个扩大信号步骤


二、高背景染色


抗体浓度太高: 稀释一抗/二抗


非特异结合: 做一个没有一抗的二抗空白对照.  如果有染色,说明二抗有非特异性结合,更换一种二抗。


阻断不够: 增加阻断孵育时间或考虑更换阻断剂。


信号放大过度: 减少信号放大孵育时间,稀释二抗


洗涤不充分: 步骤之间的适当洗涤非常重要. 确保遵循说明说上的洗涤步骤。

 

三、非特异性染色


抗体浓度过高: 降低抗体的浓度和孵育时间


一抗产自和待测样本来源同样的物种 (例. 小鼠抗小鼠): 尽量使用来自不同物种的一抗.  或者阻断内源IgG.  还可以尝试在孵育时使用1% Triton 来清洗组织.  或用TBS-Tween 20替换 PBS-Tween 20作为洗涤液。



如有其它问题,请联系Stressmarq一级代理商-欣博盛生物


全国服务热线: 4006-800-892       邮箱: market@qckc0531.com 

深圳: 0755-26755892         北京: 010-88594029         上海: 021-34613729           

广州:18024516375           香港: 852-69410778 

代理品牌网站: www.qckc0531.com 

自主品牌网站: www.neobiosescience.net

分享到:
关注欣博盛公众号
Copyright ©2021 - 2023 深圳九游会j9网站首页有限公司
  网站地图
犀牛云提供企业云服务
九游会j9网站首页