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    小鼠CIA,免疫方案及乳滴聚结实验

    2021-11-05
    浏览次数: 347

    小鼠:选择一种品系的小鼠

    DBA/1 (DBA)小鼠 C57BL/6 (B6)小鼠

    l  7-8周小鼠

    l  SPF级动物房

    l  高脂饮食


    推荐佐剂和胶原蛋白:选择1种佐剂+ 1种胶原蛋白


    货号

    佐剂


    货号

    骨胶蛋白

    7002

    Incomplete Freund’s Adjuvant (IFA) (DBA - Booster only)


    20011

    Chick Type II Collagen, Lyophilized (DBA or B6)

    7008

    Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 1 mg/ml (DBA)


    20012

    Chick Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA or B6)

    7001

    Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 4 mg/ml (DBA)


    20021

    Bovine Type II Collagen, Lyophilized (DBA)

    7023

    Complete Freund’s Adjuvant (CFA), 5 mg/ml (B6)


    20022

    Bovine Type II Collagen, 2 mg/ml Solution (DBA)



    免疫方案

    方案1: 单一免疫 (DBA mice)

    Day 0: 皮下注射:胶原乳剂加CFA: 4mg /ml结核分枝杆菌

    Day 0 - 28: 每7天给关节炎评分

    Day 28 - 56: 每2-3天给关节炎评分:关节炎发病率90 - 100%

    Day 56: 实验结束。

    方案 2: 加强免疫

    Day 0: 皮下注射:含CFA的胶原乳剂:1mg /ml (DBA)或5mg /ml结核分枝杆菌(B6)

    Day 0 - 28: 每7天给关节炎评分

    Day 21: 皮下注射(加强剂):胶原乳剂配合IFA (DBA)或CFA:5mg /ml结核分枝杆菌(B6)

    Day 28 - 56: 每2-3天给关节炎评分:关节炎发病率90 - 100% (DBA),50-70% (B6)

    Day 56: 实验结束。


    用匀浆器准备乳剂:不要使用两个注射器方法

    小鼠CIA,免疫方案及乳滴聚结实验


    步骤*:

    1. 准备材料 (图1. Homogenizer blade浆式匀浆器 (a), 带有三通旋塞的10mL注射器 (b) 和1 ml Hamilton 注射器 (c)).

    2. 锁开关。

    3. 保持在冰上(图2)。

    4. 注射器中加入CFA。

    5. 逐滴滴入等量的胶原蛋白溶液(图3)。

    6. 以10,000 - 30,000 rpm混合2分钟。搅拌时,上下移动注射器。

    7. 将注射器放入冰中冷却5分钟。

    8. 以10,000 - 30,000 rpm混合2分钟。搅拌时,上下移动注射器。

    9. 用乳滴试验评价乳剂

    10. 用三通旋塞将乳剂转移到Hamilton注射器中。


    乳滴聚结实验

    小鼠CIA,免疫方案及乳滴聚结实验

    免疫:

    小鼠CIA,免疫方案及乳滴聚结实验

    注射器中的乳剂 (没有气泡!)  (b) 注射针 (25或27-gauge x 5/8”)  (c) 限制装置

    小鼠CIA,免疫方案及乳滴聚结实验


    小鼠CIA,免疫方案及乳滴聚结实验

    不要使用腹腔注射(IP)(a) 或 静脉注射 IV (b) 的方式注射小鼠

    小鼠CIA,免疫方案及乳滴聚结实验


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