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    Spike-ACE2依赖性细胞融合

    2021-11-24
    浏览次数: 264

    InvivoGen开发了一种细胞检测方法以模拟SARS-CoV-2诱导的合胞体(syncytia)。合胞体是在患有严重COVID-19患者的肺部观察到的现象。这套工具透过简单的定量和比色测定法,助您研究Spike-ACE2依赖性细胞融合(cell fusion)。


    此测定是依赖转接分子MyD88从'供体细胞'转移到表达了NF-κB诱导性SEAP报告基因'受体细胞'来读数。

    •“供体”细胞:293-hMyD88细胞(转染pUNO1-Spike质粒后共表达Spike变异株)

    •“受体”细胞:HEK-Blue™ hACE2A549-Dual™ hACE2-TMPRSS2细胞


    共培养“供体”和'受体'细胞会驱动它们的细胞膜发生Spike-ACE2依赖性融合。在'供体'细胞中过表达的MyD88会激活信号级联反应,导致受体细胞产生NF-κB诱导性SEAP。SEAP的活性可使用检测试剂QUANTI-Blue™溶液进行测量。


    抗体的中和能力可以用SEAP分泌量的减少来评估。如图所示,

    Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a阻断了原始病毒株和P.1变异株的细胞融合,而Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a对相同的P.1变异株的抑制作用较弱。

    Spike-ACE2依赖性细胞融合 

    Fig: Cell fusion inhibition assay. 293-hMyD88 cells were transfected with either the pUNO1-Spike or pUNO1-SpikeV5 plasmid and then incubated with Anti-CoV2RBD-cas-mIgG2a, Anti-CoV2RBD-imd-mIgG2a, or Anti-βGal antibodies. These cells were then co-cultured with HEK-Blue™ hACE2 cells. After overnight incubation, cell fusion was assessed by measuring the activity of SEAP in the supernatant using QUANTI-Blue™ Solution.


    相关产品信息

    货号

    名称

    规格

    293-hmyd

    293-hMyD88 Cells

    3 -7 x 106 cells

    hkb-hace2

    HEK-BlueTM hACE2 Cells

    3 -7 x 106 cells

    a549d-cov2r

    A549-DualTM hACE2-TMPRSS2 Cells

    3 -7 x 106 cells

    p1-spike-v’x’-df

    pUNO1-SpikeV’X’-dfur

    20 µg

    p1-spike-v’x’

    pUNO1-SpikeV’X’

    20 µg

    备注:dfur表示inactivated furin site


    “x”指 Spike变异株的内部编号,详见下表表格


    InvivoGen

    PANGO

    WHO

    Original

    (D614)

    -

    V1

    (G614)

    -

    V2

    B.1.1.7

    Alpha

    V3

    B.1.351

    Beta

    V4

    B.1.429

    Epsilon

    V5

    P.1

    Gamma

    V6

    B.1.526

    Iota

    V7

    B.1.617.1

    Kappa

    V8

    B.1.617.2

    Delta

    V9

    C.37

    Lambda

    V10

    B.1.621

    Mu




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