Lymphoprep™-即用型PBMC分离液
Lymphoprep™-即用型PBMC分离液
✍ Lymphoprep™是什么？
1968 年，Arne Bøyum 博士发明了一种从人体血液中分离单核细胞的简单有效的方法1。这是一种简单快速的离心方法，利用不同细胞及密度梯度离心液之间密度的差异来分离细胞：单个核细胞(单核细胞和淋巴细胞)的浮力密度比红细胞和多形核白细胞(PMN)低。绝大多数单个核细胞的密度低于1.077克/毫升。因此，可以通过在密度为1.077 g/ml的等渗分离液中离心来分离这些细胞，红细胞和PMN可以通过分离液沉淀，同时将单个核细胞保留在样品/分离液界面。
Lymphoprep™正是基于此方法而开发的即用型单个核细胞分离液，可用于从外周血、脐带血和骨髓中分离单个核细胞，有超过45年的历史，被广泛用于文献中。作为一种高效的密度梯度离心液，Lymphoprep™与Ficoll-Paque™具有相同的密度 (如下表所示)、相似的成分，并且分离所得的细胞类型和数量几乎相同2。目前使用Ficoll-Paque™的实验室无需改变实验流程，可直接进行替换，性价比更高。
FICOLL-PAQUE™ PLUS | FICOLL-PAQUE™ PREMIUM | Lymphoprep™ | |
主要成分 | Ficoll™ PM400(蔗糖聚合物)泛影酸钠 | Ficoll™ PM400(蔗糖聚合物) 泛影酸钠 | 多聚糖 泛影酸钠 |
密度 | 1.077 ± 0.001 g/mL | 1.077 ± 0.001 g/mL | 1.077±0.001 g/mL |
是否即用型 | √ | √ | √ |
是否无菌 | √ | √ | √ |
是的检测内毒素 | √ | √ | √ |
质量控制体系 | × | ISO 13485 | GMP标准+ ISO13485 |
✍ Lymphoprep™如何使用？
1. 将血液收集到含有抗凝血剂(EDTA、肝素、ACD)的试管中，或使用去除纤维蛋白的血液。
2. 通过添加等体积的0.9% 的NaCl溶液来稀释血液。
3. 在15ml离心管中，小心地将6 ml稀释后的血液置于3 ml Lymphoprep上。避免混合血液和分离液。盖上离心管盖以防止气溶胶的形成。
4. 在外摆式转子中，在室温(约20°C)下以800 x g的速度离心20分钟。如果血液已存放超过2小时，将离心时间增加到30分钟。
5. 离心后，单核细胞在样品/分离液界面形成明显的条带，如图所示。最好使用移液管从界面吸取细胞，而不移除上层。
6. 用0.9% 的NaCl溶液或培养基稀释收获的细胞以降低溶液的密度，并通过在250×g离心10分钟沉淀细胞。
注意事项：
为了获得最大产率，在分离之前，用生理盐水以1:1的比例稀释血样很重要。
单个核细胞悬浮液中红细胞的污染通常占细胞总数的3-10 %。
在强化免疫抑制治疗期间，一些未成熟的PMN可能会与淋巴细胞结合。
使用肝素抗凝的血液时，必须除去大部分血小板，以避免在细胞毒性试验中受到抑制。
Lymphoprep™订购信息：
货号 | 名称 | 规格 |
AXS-1114544 | Lymphoprep™ | 1*250ml |
AXS-1114545 | Lymphoprep™ | 4*250ml |
AXS-1115757 | Lymphoprep™ | 20*250ml |
AXS-1114546 | Lymphoprep™ | 1*500ml |
AXS-1114547 | Lymphoprep™ | 6*500ml |
AXS-1115758 | Lymphoprep™ | 12*500ml |
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产品 | 描述 | 货号 |
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参考文献：
Bøyum, A. (1968): Separation of leucocytes from blood and bone marrow. Scand J. Clin. Lab. Invest. 21, Suppl. 97.
Yeo C et al. (2009) : Ficoll-PaqueTM versus LymphoprepTM: a comparative study of two density gradient media for therapeutic bone marrow mononuclear cell preparations Regen Med. 4(5): 689–96
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